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详细内容

自身免疫性腦脊髓炎(EAE)小鼠模型

一、實(shí)驗(yàn)材料

MOG35-55(吉爾生物,51716

CFAsigma,F5881

百日咳素(sigma,P7208

二、實(shí)驗(yàn)方法

1、抗原乳化:1mg/mlCFA1mg/mlMOG35-55混合乳化,利用三通管排出注射器中的空氣,冰上來回交替推動(dòng)活塞 30 min,抗原呈完全乳化狀態(tài)。

(也可使用高速攪拌器,4℃攪拌2min,3-5次)

2、完全乳化的抗原使用1 ml注射器分裝,排除內(nèi)空氣后保存于冰上。

3、百日咳素(PTX)的稀釋:用 1×PBS 1:25稀釋 PTX至終濃度2ug/ml。

4、小鼠尾靜脈(i.v.)注射PTX,100ul/只小鼠 。

5、小鼠氣麻后,用酒精棉球消毒小鼠前肢肩胛骨與后扇部位的皮膚,皮下注射 MOG35-55抗原乳化液于該四點(diǎn)處,每處 50μl

7、48 h后,每只小鼠再次尾靜脈注射 100 μl PTX。

8、模型誘導(dǎo)首天記為Day 0,每天統(tǒng)計(jì)小鼠體重,觀察評(píng)分 。

評(píng)分標(biāo)準(zhǔn):

 

評(píng)分

臨床體征

具體表現(xiàn)

0

無臨床癥狀

正常步態(tài),尾巴可以移動(dòng)并抬起,如果將鼠標(biāo)固定在尾巴底部,

尾巴會(huì)纏繞在圓形物體上

1

部分軟尾

正常步態(tài),尾端下垂

2

癱瘓的尾巴

正常步態(tài),尾巴下垂

3

后肢輕癱,運(yùn)動(dòng)不協(xié)調(diào)

步態(tài)不協(xié)調(diào),尾巴跛行,后肢對(duì)擠壓有反應(yīng)

4

一條后肢癱瘓

步態(tài)不協(xié)調(diào),一條后肢拖拉,尾巴跛行,一條后肢對(duì)擠壓沒有反應(yīng)

5

兩條后肢癱瘓

步態(tài)不協(xié)調(diào),雙后肢拖拉,尾巴跛行,雙后肢對(duì)擠壓沒有反應(yīng)

6

后肢癱瘓,前肢無力

步態(tài)不協(xié)調(diào),前肢用力拉扯身體,前肢在擠壓后反射,尾巴跛行

7

后肢癱瘓,前肢癱瘓

老鼠不能移動(dòng),一個(gè)前肢對(duì)腳趾擠壓做出反應(yīng),尾巴跛行

8

后肢癱瘓,前肢癱瘓

老鼠不能移動(dòng),兩個(gè)前肢對(duì)腳趾擠壓沒有反應(yīng),尾巴跛行

9

垂死的

沒有動(dòng)靜,呼吸遲緩

10

死亡


 

三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

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