一、 固定
1、 固定的意義:
固定的目的是使蛋白質(zhì)等成分凝固,及時(shí)固定可使組織結(jié)構(gòu)或細(xì)胞形態(tài)更接近生活狀態(tài)。同時(shí),固定可使組織硬化成形,便于后續(xù)的包埋、切片以及染色。因此,固定是實(shí)驗(yàn)病理學(xué)制片技術(shù)中非常重要的環(huán)節(jié)。
2、 固定劑選擇
固定劑種類較多,但目前沒有通用于能使所有被固定的細(xì)胞、組織成分都達(dá)到最佳固定效果的固定劑。目前應(yīng)用范圍最廣的是10%中性甲醛溶液和4%多聚甲醛。
3、 固定方法
(1) 浸泡固定
取出待檢組織浸泡于固定液中,固定液必須足量,一般是組織塊總體積的50倍,固定時(shí)間一般為48-72h,保證固定液充分滲入組織。
(2) 灌注固定
用于腦、心臟,肝、腎、肺組織標(biāo)本的固定,通過體內(nèi)血液循環(huán)系統(tǒng)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物全是各臟器的固定。
二、 取材
由于取出的新鮮組織較柔軟,不易直接切割成實(shí)驗(yàn)所需形狀。組織經(jīng)過固定,因固定劑的滲入,使蛋白質(zhì)變性凝固,形成一定的硬度而容易修整切取,此過程稱為取材。
實(shí)驗(yàn)所取的器官組織不可能全用于制片,要根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康,選擇性取材。對(duì)局灶性病變?nèi)〔模∽儾课灰约班徑恼=M織區(qū)域。總之,取材部位要使實(shí)驗(yàn)?zāi)康哪茉谥破瑯?biāo)本上得到完全反映。
三、 脫水
1、 脫水目的
組織經(jīng)固定后仍含有大量水分,以石蠟為包埋劑時(shí),由于水與石蠟不能混合,應(yīng)在浸蠟包埋前使用脫水劑逐步將組織中水分置換出來,這一過程稱為脫水。
2、 脫水步驟
低濃度至高濃度乙醇依次梯度脫水,再經(jīng)歷二甲苯置換,最終浸蠟完成脫水
四、 包埋
浸蠟后的組織與熔化的石蠟在模具中冷卻固定為一定形狀的過程稱為包埋。
五、 切片
組織經(jīng)石蠟包埋后,再用切片機(jī)制成切片的過程稱為切片。
切片是制片過程中很重要的環(huán)節(jié),優(yōu)質(zhì)切片要求組織切片薄、平整、邊緣齊,無刀痕、褶皺、龜裂等。切片厚度一般3-5μm,腦組織和脂肪組織稍厚,以6-8μm為宜。
六、 染色
染色是染色劑和切片組織細(xì)胞相結(jié)合的過程,目的是使組織標(biāo)本各部分在光學(xué)顯微鏡下能清晰的顯示出來,觀察各組織結(jié)構(gòu)和病變
分類:
常規(guī)染色:HE染色
特殊染色:油紅O染色、天狼星紅染色、masson染色
免疫組化染色